紫外追蹤-生物素-NHS酯（UV-Tracer Biotin NHS ester）是一種結合生物素、NHS酯活性基團與紫外追蹤功能的生物分子標記試劑。

一、化學特性

• 核心結構：由三部分組成，包括生物素（Biotin）、NHS酯基團和紫外追蹤基團。

• 生物素（Biotin）：提供與鏈霉親和素（Streptavidin）或抗生物素蛋白（Avidin）的高親和力結合能力，用于后續的分離或檢測。

• NHS酯基團：與生物分子（如蛋白質、多肽）的伯胺基（-NH?）反應，形成穩定的酰胺鍵共價連接。

• 紫外追蹤基團：嵌入二苯甲酮類熒光片段，在紫外光下發出藍色熒光，用于標記效率的實時監測。

• 物理性質：通常為淡黃色或白色粉末，溶于水及部分有機溶劑（如二甲基亞砜DMSO、N,N-二甲基甲酰胺DMF）。

結構式：

二、功能

• 共價結合：通過NHS酯基團與目標分子的伯胺基反應，實現生物素和熒光基團的共價標記。

• 熒光示蹤：在紫外光激發下發出熒光，可直接監測標記效率，無需額外熒光染料。

• 光交聯：光照后，熒光基團產生活性中間體（如氮賓），與鄰近分子形成共價交聯，可“鎖定"瞬時相互作用。

三、應用場景

• 蛋白質標記：標記蛋白質后，通過鏈霉親和素富集目標蛋白復合物，用于免疫分析（如Western Blot、ELISA），提高檢測靈敏度。

• 核酸標記：標記寡核苷酸，用于熒光原位雜交（FISH）或測序分析。

• 活細胞成像：追蹤細胞表面蛋白分布、內吞途徑或信號通路動態。

• 蛋白質相互作用研究：結合光交聯技術，捕獲瞬態相互作用，用于蛋白質組學研究。

• 傳感器開發：構建高靈敏度生物傳感器，用于檢測病原體或生物標志物。

• 靶向遞送：修飾納米載體，實現藥物或基因的靶向輸送。

四、使用注意事項

• 溶解性：NHS酯基團對水分敏感，易水解失效。溶解時應優先使用無水DMSO或DMF，再稀釋至緩沖液。從冰箱取出后，應室溫回溫30-60分鐘再開蓋，防止水汽凝結。

• 反應條件：反應pH值應調至7.0-8.5（中性/微堿性），避免使用含氨基的緩沖液（如Tris），可改用碳酸鹽緩沖液（pH 9.0）。若目標分子缺乏伯氨基或氨基被屏蔽，應改用針對其他基團的生物素化試劑。

• 標記效率驗證：通過紫外吸收、熒光檢測或Western Blot等方法驗證標記效果。

• 儲存條件：應保存在-20°C以下，避光、避濕。取用時需保持干燥，避免頻繁的溶解和凍干。

• 安全防護：操作時應佩戴適當的防護裝備，如實驗手套、護目鏡等，避免吸入、接觸皮膚和眼睛。

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