Biotin sulfo-N-hydroxysuccinimide ester 是一種水溶性生物素化試劑，全稱 Sulfosuccinimidyl biotin（磺基琥珀酰亞胺基生物素），簡稱 Sulfo-NHS-Biotin，核心功能是通過酰胺鍵高效標記含游離氨基（-NH?）的生物分子，廣泛用于蛋白質、抗體、多肽的生物素化修飾。
結構特點分子由三部分組成：
生物素端：與鏈霉親和素 / 親和素具有超高親和力（Kd≈10?1? M），用于后續靶標分子的捕獲、分離或檢測。
間隔臂：短碳鏈連接生物素與活性酯，降低空間位阻，保障偶聯效率。
磺基 - NHS 酯端：磺酸鹽基團（-SO??） 賦予分子優異水溶性，無需有機溶劑助溶；NHS 酯基團可與伯氨基（如蛋白質賴氨酸殘基的 ε-NH?）在溫和條件下反應，生成穩定酰胺鍵，同時釋放 N - 羥基琥珀酰亞胺（NHS）。
反應條件
緩沖體系：優選 PBS（pH 7.0-8.5） 或碳酸氫鈉緩沖液（pH 8.0-8.5），避免使用含氨基的緩沖液（如 Tris、甘氨酸），防止競爭反應。
反應溫度：室溫或 4℃，反應時間 30 min-2 h，具體取決于靶標分子濃度。
終止反應：加入過量甘氨酸（終濃度 50 mM）或 Tris 緩沖液，孵育 10-15 min 淬滅未反應的 NHS 酯基團。
水溶性優異：磺基修飾解決了傳統 NHS-Biotin（CAS 35013-72-0）水溶性差的問題，可直接溶于水相反應體系，避免使用 DMF、DMSO 等有機溶劑對生物分子活性的破壞。
反應特異性高：僅與游離伯氨基高效偶聯，不與巰基、羧基等其他基團反應，標記位點可控。
生物相容性好：標記后不影響靶標分子的生物活性，適用于活體、細胞及體外實驗體系。
防潮處理：NHS 酯基團對水敏感，易水解失效，試劑需在干燥環境下取用，開封后盡快使用。
pH 控制：反應體系 pH 需嚴格控制在 7.0-8.5，pH 過低會降低 NHS 酯活性，pH 過高會加速 NHS 酯非特異性水解。
純化步驟：反應后需通過透析、凝膠過濾層析（如 Sephadex G-25）去除游離生物素和副產物，避免干擾后續實驗。
投料比：根據靶標分子的氨基數量調整試劑與底物的摩爾比（通常 1:5-1:20），過高投料比易導致過度標記，影響分子活性。
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2025-12-22
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